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液相色譜柱選擇方法

  • 更新時間:2017-04-24      信息來源:本站      瀏覽次數:2219
    • 一、液相色譜柱選擇方法|液相色譜柱選擇的簡單思路
       
        1.確定分離目的確定你的應用是否要求高分離度、短分析時間、高靈敏度、長柱壽命,低的操縱本錢等等。
       
        2.評估分析物的化學性質評估分析物的化學性質..諸如化學結構、溶解性、穩定性等等。
       
        3.選擇合適的色譜柱了解色譜填料的物理和化學性質。
       
        二、液相色譜柱選擇方法|液相色譜柱選擇的條件
       
        A填料基質
       
        1.矽膠基質:純度高本錢低,強度大,化學修飾輕易,但pH值範圍有限。大多矽膠基質填料在pH2-8之間穩定,但經過特殊修飾的矽膠鍵合相可以穩定在pH1.5-10。
       
        2.聚合物基質:應用pH值範圍寬,溫度穩定(高溫可以達到80度以上),機械強度小。
       
        B顆粒外形
       
        大多現代HPLC填料都是球形顆粒,但有時是不規則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的活動相時;不規則顆粒有較大比表麵積和相對低廉的價(jia) 格。
       
        C顆粒粒徑
       
        粒徑越小柱效越高、分離度越高,但同時會(hui) 導致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決(jue) 一些複雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半製備或製備柱。
       
        D含碳量
       
        含碳量指的是矽膠表麵鍵合相的比例,與(yu) 比表麵積和鍵合覆蓋度等有關(guan) 。高含碳量進步柱容量、分辨率及分析時間,用於(yu) 要求高分離度的複雜樣品;低含碳量分析時間短、展現不同的選擇性,用於(yu) 快速分析簡單樣品及需要高含水活動相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。
       
        E孔徑和比表麵積
       
        HPLC吸附介質是多孔的顆粒,盡大多數的反應表麵於(yu) 孔內(nei) 。因此,分子必須進進孔內(nei) 才能被吸附和分離。
       
        孔徑和比表麵積是相輔相成的兩(liang) 個(ge) 概念。孔徑小比表麵積大,反之亦然。比表麵積大,增加樣品與(yu) 鍵合相之間的反應,增加保存,上樣量和複雜成分的分離度;比表麵積小,平衡時間快,適合梯度分析。
       
        F孔容和機械強度
       
        孔容,又稱“孔體(ti) 積”。指單位顆粒的空隙體(ti) 積大小。它能很好的反應填料的機械強度。孔體(ti) 積大的填料相對孔體(ti) 積小的填料機械強度要略弱。孔體(ti) 積為(wei) 1.5mL/g或更小的填料大多用於(yu) HPLC分離,而孔體(ti) 積大於(yu) 1.5mL/g的填料使用於(yu) 尺寸排阻色譜和低壓色譜。
       
        G封端封端
       
        封端能夠降低極性堿性化合物由於(yu) 與(yu) 裸露的矽醇基相互作用而產(chan) 生的拖尾峰。不封端鍵合相相對封端鍵合相會(hui) 產(chan) 生不同的選擇性,尤其是極性樣品。

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